טיפים בסיסיים לשימור הקריאה של תרבויות תאים

טיפים בסיסיים לשימור הקריאה של תרבויות תאים

תאים ממשיכים במטבוליזם שלהם במהלך פעילויות צמיחה רגילות, הדורשות השתתפות של פרוטאזות שונות. כאשר הטמפרטורה יורדת מתחת ל -70 מעלות צלזיוס, פרוטאזות מפסיקות לעבוד. לכן, בסביבה עם טמפרטורות נמוכות במיוחד, תאים יכולים לעצור את הפעילות המטבולית שלהם ולהיכנס למצב רדום המאפשר אחסון לטווח הארוך.

1. חומרים ניסיוניים

חומר בסיס:

מדיום תרבות בסיסי

סרום (FBS/NBS קונבנציונאלי)

ספסל עבודה אולטרה -אולטרה

דימתיל סולפוקסיד סטרילי (DMSO)

תמיסת מלח חיץ פוספט PBS סטרילי

אקדח פיפט

אקדח פיפט חשמלי

הכנת הניסויים

א) הכנת פיתרון הקפאה:

תאים כלליים: 55% מדיום בסיסי + 40% סרום שור (FBS/NBS) + 5% DMSO

תאים חיוניים: 90% סרום שור (FBS/NBS) + 10% DMSO

חלקה את תמיסת השימור הקריאה המוכנה לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל [קן] ומאחסנים ב -4 מעלות צלזיוס לשימוש מאוחר יותר.

(ב) הכנת תאים שיש להקפיא:

לפני הקפאת התאים, בחר תאים עם מצב צמיחה טוב ובשלב הגידול הלוגריתמי והחליף אותם במדיום טרי 12-24 שעות לפני הקפאה לשמירה על מצב התא.

2. נוהל ניסוי

1. שימו לב לצפיפות התאים שיש להקפיא, שהם בערך 80%~ 90%. השתמש באקדח פיפטה כדי לשאוף את המדיום הישן, הוסף PBS סטרילי כדי לשטוף את התאים 1-2 פעמים ולהסיר את המדיום שנותר בסביבת התרבות.

2. הוסף כמות מתאימה של טריפסין או מיץ עיכול כדי לאפשר לטריפסין להיכנס לתאים, ולהניח אותם בחממה לצורך עיכול. שימו לב למצב התאים תחת המיקרוסקופ: הציטופלזמה חוזרת בתאים והתאים כבר לא קשורים לסדינים. בשלב זה, הוסף את פתרון העצירה כדי לעצור את תהליך העיכול.

3. לבעבע בעדינות את התאים עם קצה ליצירת השעיית תאים ולצנטריפוגה את השעיית התא ב 1000 סל"ד למשך 3-5 דקות.

השלך את Supernatant, הוסף כמות מתאימה של תמיסת הקפאה, ופיפטה בעדינות כדי לגרום לתאים לספור באופן אחיד. התאם את צפיפות התא עם מדיום שימור קריאה כדי להפוך את הצפיפות הסופית ל -5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. השתמש באקדח פיפטה כדי להפריד בין הצינורות הקריוגניים בהתאם לקיבולת הצפויה, והשתמש במכונת מכסה אוטומטית כדי לכסות ולאיטום.

5. תוכנית שימור הקריא -קריאה הסטנדרטית היא קצב קירור של -1 מעלות צלזיוס עד -2 מעלות צלזיוס/דקה, וניתן להקפיא את התאים שיש להקפיא בהדרגה בהתאם לשלבים הבאים: טמפרטורת החדר → 4 מעלות צלזיוס (20 דקות) → - 20 מעלות צלזיוס (30 דקות) → -80 ° C ° C (לילה) → אחסון לטווח הארוך בחנקן נוזלי.

ניתן לאחסן אותו ישירות במקפיא בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס למשך הלילה ואז להעביר לחנקן נוזלי לאחסון.

Yongyue Medical הוא מיזם היי-טק המתמחה במו"פ, ייצור ומכירות של מתכלים ביו-רפואיים. טיפים לפיפטה, פיפטות, צלחת PCR, מוצרי תרבית תאים ומטפלים אחרים במעבדה ביולוגית. Yongyue Medical ראוי לאמון ובחירתך! ברוך הבא להתייעץ!