הסבר מפורט על התנודתיות מגיבים בניסויי PCR

הסבר מפורט על התנודתיות מגיבים בניסויי PCR.

בניסוי ה- PCR, לאחר הוספת מערכת התגובה, אנו מכסים בזהירות את המכסה ומאשרים שוב ושוב כי המכסה סגור כדי למנוע התנודתיות של מגיב. אבל לפעמים יש לנו גם ספקות: אישרנו שהמכסה סגור בחוזקה, אך לאחר סיום הניסוי, המגיב עדיין יתאדה. מה הסיבה?

למעשה, התנודתיות מגיבים היא אחת הבעיות השכיחות ביותר בניסויים של PCR, וישנם גורמים רבים המשפיעים על התנודתיות המגיבים.

אידוי מתייחס לזה במהלך ניסוי ה- PCR, פיתרון התגובה מתאדה בטמפרטורה גבוהה ואז מתעבה על קיר הבקבוק או כיסוי העליון ליצירת ערפל מים או טיפות מים, או עולה על גדותיו ישירות מפער האוויר של כובע הבקבוק או הסרט, וכתוצאה מכך בשינוי בריכוז תמיסת התגובה. שינויים, כמות תמיסת התגובה פחתה וחלקם אף התאדו ליובש, וכתוצאה מכך ניסויים לא חוקיים.

1. לחץ מכסה חם, טמפרטורה

בניסויי PCR אנו בדרך כלל מחממים את המכסה למניעת עיבוי אדי מגיב. הטמפרטורה של המכסה המחומם בדרך כלל גבוהה יותר מזו של תמיסת התגובה למניעת עיבוי אדים.

ניתן לחלק בערך את מכסי החימום של אופניים תרמיים לארבעת הסוגים הבאים: מכסי חימום לא מתכווננים, מכסי חימום מתכווננים, מכסי חימום אדפטיביים ומכסי חימום אוטומטיים. מכסה מחומם מתכוונן כולל דחיסה אטומה לאצבעות. אם לא הידוק בחוזקה, ריאגנטים יתאדו. ניתן למזער את אידוי הקצה על ידי הגדלת הלחץ על המכסה המחומם. לפעמים התדלקות יתר יכולה לצבוט את הצינור ולסובב את הידית. בנסיבות רגילות, כיסוי החימום החכם החשמלי יכול לאתר באופן אוטומטי מתכלים של גבהים שונים, לדחוס אוטומטית חומרים מתכלים, והלחץ הוא אחיד וקבוע, ובכך להפחית את אידוי המגיבים ושגיאות ידניות, ושיפור הדיוק הניסיוני ואת יכולת החזרה.

2. עיוות מתכלים

עבור דליפות קיטור, רוב האנשים חושבים כי לחץ המכסה החם אינו מספיק. הלחץ של המכסה החם חשוב מאוד, אך זה רק היבט אחד. למעשה, גם מתכלים חשובים מאוד.

לוחות פתח PCR עשויים בדרך כלל מחומרים פלסטיים, שמתרחבים ומעוותים מאוד לאחר חימום. קצב ההתרחבות התרמית של בסיס המתכת PCR המשמש למקם את לוחית פתח ה- PCR נמוך ביותר, ולוח פתח ה- PCR אינו יכול להתרחב כרגיל לאורך המטוס לאחר התרחבות תרמית. המצב הבליטה הופך את כיסוי החום העליון לא מסוגל ליצור קשר מלא על פני לוחית פתח ה- PCR, וכתוצאה מכך טמפרטורה ולחץ לא אחידה, וגורם לאידוי מגיב בקצה לוחית פתח ה- PCR, ומשפיע על אפקט גילוי ה- PCR.

3. מתכלים אינם אטומים בחוזקה

ההידוק של המכסה התרמי והמתכלים לא אומר שכובע צינור ה- PCR סגור בחוזקה, ואיכות צלחת הבאר של PCR אינה אחידה. חומרים מתכלים באיכות גבוהה, פני הזרבובית והכיסוי חלקים, והחותם מאחורי כיסוי הקופסה טוב ולא קל לדלוף אותו. לחומרים מתכלים נחותים יש זרבוביות וקווים רדיאליים לא אחידים, שיכולים בקלות לגרום לדליפה או אפילו להתייבש.

לכן, בניסויי PCR, נסה לבחור מתכלים באיכות גבוהה ומתאימה. יחד עם זאת, ניתן להרחיב את מערכת התגובה כדי למזער את השפעת אידוי המערכת על התגובה.